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D-熒光素鉀鹽
簡要描述:

D-熒光素鉀鹽是熒光素酶 (Luc) 的天然底物,對螢火蟲產(chǎn)生典型的黃綠光進(jìn)行催化。該反應(yīng)產(chǎn)生的 560 nm 化學(xué)發(fā)光在幾秒鐘內(nèi)達(dá)到峰值,當(dāng)?shù)孜餆晒馑剡^量時,光輸出與熒光素酶濃度成正比。熒光素酶 (luc) 基因是研究和活性分子篩選的常用報(bào)告基因。

  • 產(chǎn)品型號:PC11514-100mg
  • 參考價(jià)格:380
  • 更新時間:2025-06-04
  • 訪  問  量:605

詳細(xì)介紹

D-熒光素鉀鹽基本特性:

1CAS NO:115144-35-9

2化學(xué)名:4,5-Dihydro-2-(6-hydroxy-2-benzothiazolyl)-4-thiazolecarboxylic acid potassium salt,D-Luciferin firefly, potassium salt

3分子式:C11H7N2O3S2K

4分子量:318.42 g/mol

5純度:>99% (HPLC),分子生物學(xué)級(超純)

6外觀:淺黃色至黃色粉末7)溶解性:溶于水(60 mg/ml)

使用方法:

A.體外生物發(fā)光檢測

1儲存液制備用蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽,配制成15mg/ml的儲存液(100×),混勻后立即使用或分裝于-20℃或-80℃凍存,避免反復(fù)凍融。建議使用的工作液濃度為150µg/ml(相當(dāng)于468µM)。

2熒光素酶反應(yīng)緩沖液制備配方【1×,參考Yuichi Oba, et al., 2003】:100mM Tris-HCl(pH 7.8),5mM MgCl2,250µM CoA,150µM ATP。具體緩沖液組成可參考其他文獻(xiàn)資料來調(diào)整。按照以上配方制備熒光素酶反應(yīng)緩沖液(2×)。

3收集細(xì)胞裂解上清(熒光素酶表達(dá))根據(jù)需要檢測的細(xì)胞類型,選擇合適的裂解液進(jìn)行細(xì)胞裂解,離心收集上清后續(xù)檢測待用。

4螢火蟲熒光信號檢測

【注①】:螢火蟲熒光信號的檢測方法大體上取決于冷光測定儀(luminometer)類型(是手動型熒光計(jì)、單管注射型或者酶標(biāo)板讀數(shù)型熒光計(jì))。根據(jù)特定發(fā)光測定儀,來考慮注射用量和程序設(shè)置。

【注②】:需設(shè)置不含熒光素酶的孔(用作陰性對照),以測定背景熒光。

例:注射式冷光測定儀(injectible luminometer,單樣或微孔板,200µl終體積)

a吸取100µl熒光素酶反應(yīng)緩沖液(2×)到一干凈的冷光測定儀比色皿或96孔板的各孔(最好使用全白平底的96孔板);

b吸取50~98µl裂解上清到皿或孔內(nèi);

c如果有需要,用水來補(bǔ)足使得總體積到198µl;

d設(shè)置程序注射2µl熒光素儲存液(使工作濃度150µg/ml),程序:2~5秒延遲(delay),之后10s測定。

B.活體成像分析

1用無菌的PBS(w/o Mg2+)或者DPBS(w/o Mg2+)配制D-熒光素(鉀鹽)工作液(15mg/ml),0.2µm濾膜過濾除菌。混勻后立即使用或分裝于-20℃或-80℃凍存,避免反復(fù)凍融。一旦使用,放到4℃解凍,保持冰冷且避光。

2注射量取決于注射方式,具體如下:注射方式劑量靜脈注射(25-27 gauge針頭)    按10µl/g體重濃度,加入相應(yīng)體積的15mg/ml熒光素工作液    腹腔注射(25-27 gauge針頭)按10µl/g體重濃度,加入相應(yīng)體積的15mg/ml熒光素工作液肌肉注射(27 gauge針頭)50µl,濃度為1-2mg/ml熒光素工作液鼻內(nèi)注射(pipette)50µl,濃度為3mg/ml熒光素工作液

3注射入體內(nèi)10-20 min(待光信號達(dá)到較好的穩(wěn)定平臺期),再進(jìn)行成像分析。注:建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學(xué)曲線,從而確定最高信號檢測時間和信號平臺期。

 

 

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